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用于在酵母中生产重组IL-11的系统和方法

发布时间:2024-02-06 15:33:39 人气:9

用于在酵母中生产重组IL-11的系统和方法

专利类型:

发明授权

申请(专利)号:

CN201880014137.9

申请日:

2018-01-15

授权公告号:

CN110382524B

授权公告日:

2024-02-06

申请人:

南沙生物科技(香港)公司

地址:

中国香港干诺道中19-20冯氏大厦10层

发明人:

朱桂林; 霍文逊; 刘耀南

专辑:

工程科技Ⅰ辑

专题:

有机化工;化学

主分类号:

C07K14/54

分类号:

C07K14/54;C12N15/81;C12P21/02

国省代码:

81

页数:

45

代理机构:

北京纪凯知识产权代理有限公司

代理人:

张全信

优先权:

2017-01-16 US 62/446,762

国际申请:

2018-01-15 PCT/US2018/013708

国际公布:

2018-07-19 WO2018/132787 EN

进入国家日期:

2019-08-27

主权项:

1.产生IL-11的方法,其包括:将编码重组IL-11的表达载体引入酵母中,其中所述重组IL-11不是融合蛋白的形式;在诱导所述重组IL-11表达的条件下在培养基中培养所述酵母,其中所述重组IL-11是失活的重组IL-11;将上清液与所述培养基的固体分离;使所述上清液与足以以4%(w/v)和12%(w/v)之间的终浓度提供从而形成包括沉淀的悬浮液的量的聚乙二醇接触,所述聚乙二醇具有2,000D至20,000D的平均分子量,其中所述沉淀包括所述失活的重组IL-11;在包括4M至10M的盐酸胍的溶液中溶解所述沉淀,以产生粗IL-11溶液;在4至12的pH下将所述粗IL-11溶液的盐酸胍的浓度降低至0.7M或更少,并将所述粗IL-11溶液的蛋白质浓度降低至0.1mg/mL至10mg/mL,以产生包括活性重组IL-11的再折叠的IL-11溶液;使所述再折叠的IL-11溶液与阳离子交换介质接触;和从所述离子交换介质洗脱纯化的IL-11。

摘要:

重组IL-11在酵母中表达,然后通过沉淀、在变性剂存在下溶解沉淀并使溶解的蛋白质复性,从需氧发酵培养基中分离。通过阳离子交换和疏水性相互作用色谱进一步纯化复性rhIL-11,以提供具有高生物活性和低rhIL-11二聚体和氧化rhIL-11含量的高度纯化的rhIL-11。

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